“Análisis de la Expresión del Gen srpC de Synechococcus elongatus PCC 7942”

Un determinante de la resistencia a cromato muy bien estudiado es la proteína de membrana ChrA presente en el plásmido pUM505 de Pseudomonas aeruginosa. La función de ChrA consiste en transportar el cromato hacia el exterior celular en forma dependiente del potencial de membrana. Se han encontrado numerosos homólogos de esta proteína. Synechococcus elongatus PCC 7942 es una cianobacteria unicelular que posee el plásmido pANL (~46 kilobases) en el cual se han identificado genes cuya expresión es regulada por los niveles de sulfato, entre ellos el gen srpC. srpC codifica la proteína SrpC, un homólogo de las proteínas ChrA de la superfamilia CHR. Una mutación en srpC ocasionó mayor resistencia a cromato comparada con la cepa silvestre, sugiriendo que SrpC probablemente participe en la captación de cromato. Posteriormente se demostró que SrpC confiere resistencia a cromato por medio de la expulsión del cromato del citoplasma. El objetivo de este trabajo es determinar la función del gen srpC y evaluar su expresión en relación con cromato y sulfato. En la cepa W3110 de Escherichia coli con el gen clonado en el vector pACYC184 se vio un fenotipo de resistencia a cromato de la cepa respecto a la cepa W3110 que contiene el cósmido 2F10 (que contiene genes del metabolismo de azufre) y el control sensible en caldo nutritivo, opuesto a lo que se vio en ensayos en medio mínimo M9 con 0.2 mM sulfato, donde se comportó de manera similar que a W3110(2F10) y al control sensible. El gen srpC fue clonado en el vector pUCP20 y el plásmido recombinante fue transferido a E. coli W3110 y P. aeruginosa PAO1. Se realizaron pruebas de susceptibilidad a cromato en medios de cultivos con diferente concentración de sulfato, en los cuales las transformantes tuvieron un comportamiento similar respecto al control sensible, indicando que en el vector pUCP20 el gen srpC no se expresa. Mediante ensayos de RT-PCR, se observó que srpC se expresa de forma constitutiva, aunque la expresión fue variable dependiendo del medio de crecimiento, además de que la expresión del gen se vio ligeramente afectada ante la presencia de cromato. La expresión observada en W3110(pACYC-SrpC) probablemente la suficiente para que presente el fenotipo de resistencia a cromato, observada en las pruebas de susceptibilidad. Sin embargo, aunque en W3110(2F10) se vio expresión, ésta no se reflejó en los ensayos de susceptibilidad a cromato, lo que indica que probablemente alguno de los genes aledaños a srpC afecta la expresión de este gen